InTray DM

Terreno di coltura arricchito da utilizzare per la ricerca dei dermatofiti nei campioni clinici.

Descrizione del sistema e dei suoi principi
I dermatofiti sono funghi che appartengono alle famiglie di Microsporum, Trichophyton ed Epidermophyton. Sono in grado di metabolizzare la cheratina presente nella pelle, nei capelli e nelle unghie degli ospiti. I funghi in modo particolare possono invadere il tessuto cutaneo dell’ospite vivente ma raramente penetrano nel tessuto sottocutaneo.
La tigna e l’epidermomicosi sono due termini utilizzati per descrivere le dermatosi micotiche.
Il terreno di coltura InTray DM è stato ideato in modo tale da assumere un colore rosso in presenza di crescita di dermatofiti. Quando viene incubato a temperatura ambiente, il cambiamento di colore abitualmente appare entro uno-dieci giorni dopo l’inoculo. Inoltre il terreno di coltura è stato preparato per permettere lo sviluppo di colonie particolari, con caratteristiche di identificazione tipiche macro- e microscopiche. Il terreno di coltura inibisce la crescita della maggior parte dei batteri Gram-positivi, dei batteri Gram-negativi, dei lieviti e dei funghi saprofiti.

Raccolta dei campioni e trattamento
Le raccolte dei campioni pongono le maggiori difficoltà nell’utilizzo di InTray DM. InTray DM è stato creato per la coltura di campioni di peli, raschiati di cute e tagli o raschiati d’unghia. Detergere l’area infetta con alcool al 70%. I campioni di peli dovranno essere prelevati dall’estremità non infetta e diversi (3-6) piccoli pezzi, di circa 1cm di lunghezza, dovranno essere tagliati dalla parte infetta per l’inoculazione sulla superficie del terreno di coltura. I raschiati di cute dovranno essere effettuati, con l’aiuto di una lama affilata, dal bordo esterno di una lesione attiva. Il liquido vescicolare non è indicato per una coltura di dermatofiti. Se l’area infetta presenta vescicole, i raschiati di cute dovranno essere presi dalla superficie. Sia i pezzi di unghia sia i prelievi al di sotto dell’unghia possono essere coltivati. Per ottenere i migliori risultati possibili, tagliare le unghie a piccoli pezzi. Vedi la bibliografia per la raccolta dei campioni e i dettagli sulla procedura di trattamento.
E’ spesso difficile raccogliere materiale vitale dall’unghia infetta perché gli organismi viventi stanno sotto all’unghia stessa. Se si sospetta fortemente una infezione fungina e se InTray DM risulta negativo, potrebbe essere opportuno rifare l’esame, raccogliendo il campione con più cura. Dopo l’inoculo, aprire InTray DM soltanto in una vetrinetta biologicamente sicura.

Procedura di inoculo
Sollevare l’angolo inferiore destro in corrispondenza dell’apposita asola trasparente del coperchio di InTray DM finché il sigillo di protezione sull’agar non sarà completamente visibile. Togliere il sigillo tirando la linguetta e gettare il sigillo. (Figura 1)
NON TOGLIERE LA STRISCIA DEL FILTRO BIANCO TYVEK SOPRA Il FORO DI APERTURA!
Inoculare il campione (peli, unghie oppure raschiati di cute) sulla superficie del terreno di coltura. Per i raschiati di cute può essere utilizzata una ansa sterile per inoculo precedentemente inumidita toccando la superficie del terreno di coltura. Per i tagli di unghia o di peli sono appropriate le pinze sterili. (Figura 2)
Richiudere InTray DM pressando insieme i lati del contenitore contro la cornice di plastica. Premere tutto intorno per assicurare una chiusura totale. (Figura 3)
Incubare per 10 giorni a temperatura ambiente (18o C-25o C). Verificare InTray DM ogni giorno per i cambiamenti di colore. NON APRIRE. Osservare la crescita della colonia ed il cambiamento di colore attraverso la finestra trasparente.

Lettura dei risultati
Osservare il terreno di coltura per la crescita e il cambiamento di colore senza aprire InTray DM.
Positivi per i dermatofiti: Se, nell’intervallo da uno a dieci giorni, il colore del terreno di coltura cambia verso il rosso in corrispondenza dell’inoculo e si osserva la crescita di una colonia biancastra, rosa pallido o beige, InTray DM è positivo per i dermatofiti.
Negativo: Se InTray DM non evidenzia alcun cambiamento di colore dieci giorni dopo l’inoculo il risultato è presumibilmente negativo.

Limiti dell'esame
Alcuni funghi crescono sul terreno di coltura e producono un cambiamento di colore rosso.
Tuttavia, in questo caso le colonie sono di colore più scuro (marrone, verde o nero) e la crescita è normalmente più lenta che per i dermatofiti.
Lo sviluppo di specie di Candida (lieviti) non viene inibito su InTray DM ma esse non producono inizialmente alcun cambiamento di colore. La crescita prolungata cambierà lentamente il colore al rosso. Tuttavia l’aspetto delle colonie di lieviti è pastoso, simile alla cera o lucido (simile al vetro), diverso da quello della crescita lanosa oppure granulosa dei dermatofiti.
I laboratori autorizzati per esami moderatamente complessi possono identificare l’organismo che cresce sul terreno di coltura con un esame microscopico attraverso la finestra trasparente senza aprire InTray DM.

Controllo di qualità
Questo prodotto è stato testato e soddisfa gli standard NCCLS approvati per i terreni di coltura preparati commercialmente come richiesto da CLIA‘88. Al momento della produzione il controllo di qualità viene effettuato su ogni lotto di InTray DM. Viene verificata sia la capacità dei terreni di coltura di sostenere la crescita e di consentire le reazioni biochimiche attese sia la morfologia.

Specie Testata	ATCC	Risultati attesi
T. mentagrophytes	9533	Crescita
T. rubrum	28188	Crescita
T. tonsurans	28942	Crescita
E. floccosum	52066	Crescita
M. canis	36299	Crescita
M. gypseum	14683	Crescita
Aspergillus niger	16404	Inibizione significativa
Penicillium	10106	Inibizione significativa
Pseudomonas aeruginosa	27853	Inibizione significativa
Staphylococcus aureus	25923	Inibizione significativa

Conservazione
Conservare InTray DM a temperatura ambiente (18°-25°C). Evitare refrigerazione, congelamento o conservazione prolungata a temperature superiori ai 40°C. Non utilizzare InTray DM se il terreno di coltura mostra segni di deterioramento o di contaminazione.

Reagenti
Il terreno di coltura InTray DM contiene soytone, carboidrati, stimolanti della crescita, agenti antimicrobici compresi la cicloeximida, indicatore di colore, e l’agar in acqua distillata.

Precauzioni
Da impiegare soltanto in vitro per uso diagnostico. Una volta che InTray DM è stato inoculato e richiuso, aprire soltanto in una vetrinetta biologicamente sicura. A causa dei materiali patogeni coinvolti, InTray DM dovrà essere distrutto con l’autoclave o con un equivalente mezzo di eliminazione dei rifiuti.

Formato
Scatola per 20 determinazioni in confezioni singole.

Biografia
  -   Kwon-Chung, K.J. and Bennett, J.E., Medical Mycology, Lea and Febiger: Philadelphia, 1992.
  -   Murray, P.R., Baron, E.J., Pfaller, M.A., Tenover, F.C., Yolkem, R.H., Manual of Clinical Microbiology, 6th ed., American Society for Microbiology: Washington, D.C. 1995, pp. 709-722.
  -   Larone, D.H., Medically Important Fungi: A Guide to Identification, 2nd ed., American Society for Microbiology: Washington, D.C., 1995.